Florencia Bertotti est née le 15 mars 1983, du côté de Palermo, un quartier de Buenos Aires. Ses parents se séparent alors qu'elle n'a que 7 ans. Son père meurt en 1999, alors qu'elle est en pleintournage de la série Verano del 98.



Sa carrière à la télévision débute à l'âge de 12 ans. Florencia fait sa première apparition dans une publicité pour la confiture « Arcor ». La même année, elle obtient son premier vrai rôle, dans la série Dulce Ana, où elle y interprète la fille de Fabian (Orlando Carrio). Elle tournera ensuite deux autres séries, Modelos 90 60 90, en 1996, puis De Corazon, en 1998.



Ses débuts au cinéma sont marqués par son rôle dans le film Mala Epoca, en 1998. Florencia interprète Connie, jeune étudiante à l'Université du Cinéma. Son second film, plus ambitieux, est El Faro, en 1999, dirigé par Eduardo Mignogna. Elle n'a que 15 ans à l'époque et joue le rôle d'une jeune fille enceinte âgée de 18 ans.



Flor apparait ensuite dans le feuilleton Verano del 98, entre 1999 et 2000, où elle joue Lola Guzman, une adolescente difficile. Elle y fait la connaissance de Guido Kaczka, qui interprète Octavio. Quand Verano del 98 se termine, Flor s'investit de plus en plus dans l'équipe Pol-ka.



En 2001, on la retrouve à nouveau dans la série Culpables. Elle est Sofia, une jeune fille qui découvre sa tendance homosexuelle. Florencia interrompt le tournage pendant un mois, période pendant laquelle elle tourne le film Déjala Correr, avec Pablo Rago, Julieta Diaz et Fabian Vein. Elle y interprète Belén, jeune étudiante aux Beaux Arts, meilleure amie du héros Diego.


En 2002, elle tourne dans la série Son Amores, où elle est Valeria Marquesi. Cette série lui permet de faire ses débuts au théâtre. Elle recevra d'ailleurs deux années de suite, en 2002 puis en 2003, le Prix Martin Fierro de la meilleure actrice pour ce programme.



En 2005, Florencia joue dans Floricienta, nouvelle série de l'argentine Cris Morena. De cette série sont nés 5 CDs, mais c'est surtout l'un des plus gros succès en Argentine entre 2004 et 2005. La série s'est arrêtée en 2005 car Florencia est partie pour une tournée 'Floricienta' à travers le monde.